Calculadora de biología y laboratorio de MAXScanner
Calculadora de temperatura de hibridación para PCR: par de cebadores, ΔTm y rango en gradiente
Estima un punto de partida práctico de temperatura de hibridación para PCR a partir de los valores de Tm de los cebadores directo e inverso, señala los pares de cebadores desajustados y genera un rango en gradiente para la optimización empírica.
Última actualización: 2026-09-17
Resultados
Fórmula, ejemplo y suposiciones
Ta inicial≈Tm del cebador con menor Tm−5 °C; el gradiente se muestra alrededor de la estimación inicial.
Para cebadores con una Tm de 60 °C y 61 °C, una temperatura de hibridación inicial de 55 °C con un gradiente cercano es un primer experimento útil.
- La temperatura de hibridación depende del protocolo y de la polimerasa; prevalecen las indicaciones del fabricante.
- El resultado es un punto de partida para la optimización empírica, no una garantía de especificidad ni de rendimiento de la amplificación.
Preguntas frecuentes
¿Por qué usar la Tm del cebador con menor Tm?
Un paso de hibridación común debe permitir que ambos cebadores se unan; por eso, una regla sencilla de punto de partida se ajusta al cebador térmicamente menos estable.
¿Qué ocurre si los valores de Tm de los cebadores difieren mucho?
Una ΔTm elevada es una advertencia de diseño. En lugar de forzar una temperatura de compromiso, considera rediseñar el par y compruébalo experimentalmente.