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Calculadora de Temperatura de Anelamento para PCR — Par de Primers, ΔTm e Faixa de Gradiente
Estime um ponto de partida prático para a temperatura de anelamento na PCR a partir dos valores de Tm dos primers forward e reverse, sinalize pares de primers incompatíveis e gere uma faixa de gradiente para otimização experimental.
Última atualização: 2026-09-17
Resultados
Fórmula, exemplo e premissas
Ta inicial≈Tm do primer de menor Tm−5 °C; gradiente exibido em torno da estimativa inicial.
Para primers com Tm de 60 °C e 61 °C, uma estimativa inicial de anelamento de 55 °C com um gradiente próximo é um primeiro experimento útil.
- A temperatura de anelamento depende do protocolo e da polimerase utilizada; as orientações do fabricante têm prioridade.
- O resultado é um ponto de partida para a otimização experimental, e não garante a especificidade nem o rendimento da amplificação.
Perguntas frequentes
Por que usar a Tm do primer de menor valor?
Uma etapa de anelamento compartilhada precisa permitir que os dois primers se liguem; por isso, uma regra simples de partida toma como referência o primer termicamente menos estável.
E se os valores de Tm dos primers forem muito diferentes?
Um ΔTm elevado é um alerta de projeto. Em vez de forçar uma temperatura de compromisso, considere redesenhar o par e validá-lo experimentalmente.