Calculadora de biologia e laboratório MAXScanner
Calculadora de Número de Cópias de DNA — ng/µL, pb, cópias/µL e cópias de qPCR
Converta a concentração mássica de DNA de fita dupla ou simples e o comprimento do fragmento em moléculas por microlitro, moléculas totais e cópias de molde de qPCR por reação. O peso molecular exato opcional substitui a estimativa por pares de bases.
Resultados
Fórmula, exemplo e premissas
MM≈comprimento×660 g/mol para DNA de fita dupla ou ×330 g/mol para fita simples; cópias/µL=(ng/µL×10⁻⁹/MM)×Nₐ; cópias/reação=cópias/µL×µL de molde.
Um amplicon de DNA de fita dupla de 150 pb a 10 ng/µL contém cerca de 6,08×10¹⁰ moléculas/µL; ao adicionar 2 µL, somam-se cerca de 1,22×10¹¹ moléculas de molde.
- 660 e 330 g/mol por base são aproximações médias de planejamento; use o peso molecular exato do fornecedor quando disponível.
- O número de cópias é uma conversão de contagem de moléculas, não uma previsão da eficiência de amplificação do qPCR nem dos valores medidos de Ct/Cq.
Perguntas frequentes
O DNA plasmidial circular usa uma fórmula de peso molecular diferente?
A topologia não altera de forma relevante a conversão de massa por par de bases. Use o comprimento total do plasmídeo e o peso molecular do DNA de fita dupla, a menos que você tenha um peso molecular exato.
Como obtenho as cópias por reação de qPCR?
Calcule as cópias por microlitro a partir da concentração e do comprimento do fragmento e, em seguida, multiplique pelo volume de molde adicionado a uma reação.