MAXScanner 生物與實驗室計算機
PCR 退火溫度計算機｜引子對、ΔTm 與梯度範圍
依正向與反向引子的 Tm 值估算實用的 PCR 退火溫度起始值，標示不匹配的引子對，並產生用於實驗最佳化的梯度範圍。
最後更新：2026-09-17
計算結果
請輸入兩個引子的 Tm 值，且都需高於 0 °C
公式、範例與假設條件
起始 Ta≈較低引子的 Tm−5 °C；梯度範圍顯示於起始估算值附近。
若引子的 Tm 分別為 60 °C 與 61 °C，以 55 °C 作為起始退火溫度估算，並搭配鄰近的梯度範圍，是實用的第一次實驗。
- 退火溫度取決於實驗步驟與聚合酶，應以廠商建議為準。
- 結果僅為實驗最佳化的起點，不保證擴增的特異性或產量。
常見問題
為什麼以較低的引子 Tm 作為基準？
共用的退火步驟必須讓兩條引子都能結合，因此簡單的起始規則會以熱穩定性較低的引子為基準。
若兩條引子的 Tm 值差異很大該怎麼辦？
ΔTm 過大是一項設計警示。與其強行折衷取一個退火溫度，不如考慮重新設計該引子對，並以實驗加以驗證。