MAXScanner 生物與實驗室計算機
Primer Tm 計算機｜熔點溫度、GC% 與引子對檢查
由序列估算 DNA 引子的熔點溫度，比較正向與反向引子，檢視 GC 含量與 ΔTm，並說明所用的計算方法。
最後更新：2026-09-17
計算結果
正向引子 Tm 53.83 °C
正向引子 GC 含量 55%
正向引子長度 20 nt
公式、範例與假設條件
短寡核苷酸：Tm≈2(A+T)+4(G+C)。較長寡核苷酸：Tm≈64.9+41·(GC−16.4)/N。
GC 含量平衡的 20 個鹼基引子，其熔點通常落在例行 PCR 最佳化時作為起始參考的溫度範圍附近。
- 這是一項教學與規劃用的估算值；緩衝液成分與聚合酶系統可能使實驗中的 Tm 產生偏移。
- 若涉及序列關鍵的工作，請使用最近鄰計算機，並依實際的離子濃度與寡核苷酸濃度進行比對。
常見問題
為什麼不同的引子 Tm 計算機結果會不一致？
它們可能採用不同的熱力學模型、鹽離子校正方式、寡核苷酸濃度與緩衝液假設。比較時應檢視計算方法與條件，而不只看最終數值。
5′ 端的選殖延伸序列（tail）要不要納入計算？
就第一循環的引發而言，應另外評估與模板結合的區域，因為不與模板互補的延伸序列在初始階段不會與模板配對。