MAXScanner 生物与实验室计算器
PCR退火温度计算器 — 引物对、ΔTm与梯度范围
根据正向和反向引物的Tm值估算实用的PCR退火温度起始点，标记不匹配的引物对，并生成用于经验优化的梯度范围。
最后更新：2026-09-17
计算结果
请输入两个引物的Tm值，且均须高于 0 °C
公式、示例与假设
起始Ta≈较低引物Tm−5 °C；梯度围绕起始估算值显示。
对于Tm分别为60 °C和61 °C的引物，以55 °C作为起始退火温度估算并配合附近的梯度设置，是一个有用的首轮实验。
- 退火温度取决于具体实验方案和聚合酶，应以厂商说明书为准。
- 该结果仅作为经验优化的起点，并不保证扩增的特异性或产量。
常见问题
为什么以较低的引物Tm为基准？
共用的退火步骤必须让两条引物都能结合，因此简单的起始规则以热稳定性较差的引物为基准。
如果两条引物的Tm值相差很大怎么办？
ΔTm过大是一个设计警示。与其强行取一个折中温度，不如考虑重新设计该引物对，并通过实验加以验证。