MAXScanner 生物与实验室计算器
引物Tm计算器 — 解链温度、GC含量与引物对检查
根据序列估算DNA引物的解链温度，比较正向和反向引物，检查GC含量与ΔTm，并查看所用的计算方法。
最后更新：2026-09-17
计算结果
正向引物Tm 53.83 °C
正向引物GC含量 55%
正向引物长度 20 nt
公式、示例与假设
短寡核苷酸：Tm≈2(A+T)+4(G+C)。较长寡核苷酸：Tm≈64.9+41·(GC−16.4)/N。
一条GC含量均衡的20碱基引物，其Tm通常落在常规PCR优化的起始温度范围附近。
- 这是用于教学和实验规划的估算值；缓冲液成分和聚合酶体系可能使实际实验中的Tm发生变化。
- 对于对序列要求严格的工作，请结合实际离子浓度和寡核苷酸浓度，与最近邻法计算器进行比对。
常见问题
为什么不同的引物Tm计算器结果不一致？
它们可能采用不同的热力学模型、盐浓度校正方法、寡核苷酸浓度和缓冲液假设。比较时应关注方法和条件，而不仅仅是最终数值。
5′端克隆接头是否应计入？
在首轮引物结合时，应单独评估与模板结合的区域，因为不参与退火的非互补接头在开始时并不会与模板配对。