Calcolatore di biologia e laboratorio di MAXScanner
Calcolatore efficienza qPCR — Curva standard, pendenza, R² e residui
Calcola l'efficienza di amplificazione qPCR a partire dalla pendenza oppure adatta una curva standard completa Ct/Cq in funzione della quantità di stampo. Ottieni pendenza, intercetta, R², efficienza, fattore di amplificazione e residui punto per punto.
Adatta la curva standard
Una riga per ogni standard: quantità del modello, Ct/Cq. La quantità può essere numero di copie, concentrazione o quantità relativa, ma deve restare su un'unica scala coerente.
Risoluzione rapida da pendenza a efficienza
Formula: E% = (10^(-1/pendenza) - 1) × 100. Considerare le soglie di qualità come indicazioni di contesto del saggio, non come sostituto del proprio protocollo o dei criteri di validazione.
Verifica dei residui punto per punto
| Quantità | log₁₀ quantità | Ct/Cq misurato | Previsto | Residuo |
|---|---|---|---|---|
| 1000000 | 6,0000 | 15,2 | 15,200 | -0,000 |
| 100000 | 5,0000 | 18,5 | 18,500 | 0,000 |
| 10000 | 4,0000 | 21,8 | 21,800 | 0,000 |
| 1000 | 3,0000 | 25,1 | 25,100 | 0,000 |
| 100 | 2,0000 | 28,4 | 28,400 | 0,000 |
Come funziona questo calcolatore di curva standard
Inserisci la quantità di stampo e il valore Ct/Cq misurato per ogni standard. Il calcolatore calcola log₁₀ di ogni quantità di stampo positiva, adatta una retta con il metodo dei minimi quadrati ordinari e ricava da essa l'efficienza di amplificazione. A differenza di un semplice widget basato solo sulla pendenza, mantiene visibili R², intercetta, Ct/Cq previsti e ogni residuo, così puoi verificare la curva invece di affidarti a un'unica percentuale.
Flusso di lavoro utile
Pianifica gli standard con il calcolatore di diluizione seriale, converti la concentrazione del DNA in copie molecolari quando necessario, quindi incolla qui la serie di standard misurata. Mantieni coerenti le unità per tutte le quantità di stampo.
Domande frequenti
Come si calcola l'efficienza qPCR dalla pendenza?
L'efficienza si calcola come (10^(-1/pendenza)-1)×100%. Una pendenza vicina a -3,322 corrisponde a un'efficienza di amplificazione di circa il 100%.
Posso calcolare pendenza e R² dalla mia serie di diluizioni?
Sì. Incolla almeno tre coppie di quantità di stampo e valori Ct/Cq. Il calcolatore applica la trasformata log10 alle quantità di stampo positive e adatta Ct/Cq rispetto a log10(stampo) con il metodo dei minimi quadrati ordinari.
Perché mostrare i residui?
I residui indicano quanto ogni valore Ct/Cq misurato si discosta dalla curva standard adattata, rendendo più facile individuare un punto di diluizione anomalo senza nasconderlo.