Calculadora de biologia e laboratório MAXScanner
Calculadora de Ligação de DNA — Razão Molar Inserto:Vetor, ng, fmol e Volumes de Pipetagem
Calcule a massa de DNA do inserto necessária a partir dos comprimentos do vetor e do inserto, compare a razão molar real inserto:vetor, converta os dois fragmentos em femtomols e, opcionalmente, calcule os volumes de pipetagem a partir das concentrações das soluções-estoque.
Resultados
Fórmula, exemplo e premissas
ng de inserto alvo=ng do vetor×(pb do inserto/pb do vetor)×razão alvo; fmol de DNA de fita dupla=ng×10⁶/(pb×660).
Com 50 ng de um vetor de 3.000 pb e um inserto de 1.000 pb, uma razão molar alvo de 3:1 exige 50 ng de inserto.
- A equação de razão em massa pressupõe que os dois fragmentos são DNA de fita dupla.
- Uma razão molar útil depende da química de montagem, do tipo de extremidade, do desenho dos fragmentos e do protocolo; a calculadora apresenta o cálculo aritmético, e não prescreve uma condição de laboratório.
Perguntas frequentes
Por que usar razão molar em vez de massas iguais de DNA?
A ligação une moléculas. Fragmentos curtos contêm mais moléculas que fragmentos longos com a mesma massa; por isso, o comprimento do fragmento precisa ser incluído.
A calculadora também calcula volumes de pipetagem?
Sim. Informe as concentrações das soluções-estoque do vetor e do inserto para converter as quantidades calculadas em nanogramas para microlitros.