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Calculadora de Eficiência de qPCR — Curva Padrão, Inclinação, R² e Resíduos
Calcule a eficiência de amplificação do qPCR a partir da inclinação ou ajuste uma curva padrão completa de Ct/Cq versus quantidade de molde. Obtenha inclinação, intercepto, R², eficiência, fator de amplificação e resíduos ponto a ponto.
Ajuste sua curva padrão
Uma linha por padrão: quantidade do molde, Ct/Cq. A quantidade pode ser de cópias, concentração ou quantidade relativa, mas deve permanecer em uma escala consistente.
Cálculo rápido: inclinação → eficiência
Fórmula: E% = (10^(-1/inclinação) - 1) × 100. Trate os limites de qualidade como orientação do contexto do ensaio, e não como substituto do seu protocolo ou dos critérios de validação.
Auditoria de resíduos ponto a ponto
| Quantidade | log₁₀ quantidade | Ct/Cq medido | Previsto | Resíduo |
|---|---|---|---|---|
| 1000000 | 6,0000 | 15,2 | 15,200 | -0,000 |
| 100000 | 5,0000 | 18,5 | 18,500 | 0,000 |
| 10000 | 4,0000 | 21,8 | 21,800 | 0,000 |
| 1000 | 3,0000 | 25,1 | 25,100 | 0,000 |
| 100 | 2,0000 | 28,4 | 28,400 | 0,000 |
Como funciona esta calculadora de curva padrão
Informe a quantidade de molde e o Ct/Cq medido para cada padrão. A calculadora obtém log₁₀ de cada quantidade positiva de molde, ajusta uma reta por mínimos quadrados ordinários e, a partir da inclinação, deriva a eficiência de amplificação. Diferentemente de um widget que mostra apenas a inclinação, ela mantém visíveis o R², o intercepto, o Ct/Cq previsto e cada resíduo, para que você possa inspecionar a curva em vez de confiar em um único percentual.
Fluxo de trabalho útil
Planeje os padrões com a calculadora de diluição seriada, converta a concentração de DNA em cópias moleculares quando necessário e, em seguida, cole aqui a série de padrões medida. Mantenha as unidades consistentes em todas as quantidades de molde.
Perguntas frequentes
Como a eficiência do qPCR é calculada a partir da inclinação?
A eficiência é (10^(-1/inclinação)-1)×100%. Uma inclinação próxima de −3,322 corresponde a aproximadamente 100% de eficiência de amplificação.
Posso calcular a inclinação e o R² a partir da minha série de diluições?
Sim. Cole pelo menos três pares de quantidade de molde e Ct/Cq. A calculadora aplica log10 às quantidades positivas de molde e ajusta Ct/Cq em função de log10(molde) pelo método dos mínimos quadrados ordinários.
Por que mostrar os resíduos?
Os resíduos mostram o quanto cada Ct/Cq medido se afasta da curva padrão ajustada, facilitando a identificação de um ponto de diluição incomum sem ocultá-lo.